技術(shù)文章
Technical articles
用于染色的培養(yǎng)細(xì)胞既可以是貼壁細(xì)胞，也可以是懸浮細(xì)胞。貼壁細(xì)胞通常使其生長在合適的固相支持物上；懸浮細(xì)胞可以直接固定，也可以通過甩片或使用化學(xué)黏合劑黏附在固相支持物上。（一）貼壁細(xì)胞貼壁細(xì)胞的準(zhǔn)備比較簡單，可以使其生長于適當(dāng)?shù)妮d玻片、蓋玻片或塑料組織培養(yǎng)皿中。如果實(shí)驗(yàn)要求高分辨率或需拍照，細(xì)胞應(yīng)生長于載玻片或蓋玻片上；如果實(shí)驗(yàn)的分辨率要求不高，或者是大量樣品的篩選，可使細(xì)胞生長于塑料組織培養(yǎng)皿中。將貼壁細(xì)胞生長在固相支持物上有其*的優(yōu)點(diǎn)，操作步驟，如沖洗、固定、通透及染色均較...
處理懸浮細(xì)胞的一個(gè)簡單辦法是在固定細(xì)胞之前把細(xì)胞黏附在固相支持物上。方法之一是使用甩片機(jī)。細(xì)胞在固定之前，用特殊的離心方法將細(xì)胞甩至載玻片上。需要注意的是離心力可使細(xì)胞壓癟并擴(kuò)張，使抗體更容易結(jié)合細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)，但也輕微扭曲了正常的細(xì)胞結(jié)構(gòu)。1．所需溶液和儀器PBS及甩片機(jī)。2．操作步驟（1）用PBS洗滌細(xì)胞（400r/min2X106／m1；離心5min），并重懸于PBS中。調(diào)整濃度至1～（2）將顯微鏡載玻片固定于甩片機(jī)的轉(zhuǎn)頭上，然后加入0．1—0．5ml細(xì)胞懸液；（3）迅速...
[器材和試劑]●包被緩沖液●PBST●PBBST[PBS，1％TritonX—100，3％BSA（Sigma）]●兔抗人Fc—特異性IgG（Pierce）：用包被緩沖液稀釋為5．0ug/ml①●HRP標(biāo)記的抗噬菌體抗體（AmershamBiosciences）：用封閉液以1/10000比例稀釋●顯色液[3，3’，5，5’—四甲基聯(lián)苯胺（TMB）液體底物系統(tǒng)，Sigma][方法]1．將200ul兔抗人Fc—特異性IgG等量分加到各孔中。4℃孵育過夜。2．用PBST洗滌多孔板。3...
每一輪的親和選擇包括原始的或富集的gⅥ—cDNA文庫中噬菌粒顆粒的獲取和純化以及它們自身的淘選過程。介紹兩種不同的方法來抽提特異的噬菌體。1噬菌體文庫的獲取和純化在每輪淘選循環(huán)中的起始部分，（富集的）Topl0F，細(xì)胞經(jīng)輔助噬菌體被雙重感染以便產(chǎn)生和純化gⅥ—cDNAt噬菌粒顆粒，從而進(jìn)行下一輪的淘選。在淘選過程中，如果沒有特異的緩沖液且噬菌體對誘餌的親和力較高（如免疫親和篩選），此時(shí)經(jīng)雙重感染獲得的噬菌體顆粒并不一定要純化。2生物素化的誘餌的制備用不同的配體標(biāo)準(zhǔn)化淘選的一個(gè)...
蛋白酶分類作用位點(diǎn)已知抑制物氨基肽酶金屬蛋白酶帶有自由氨基的L-氨基酸氨基末端；不能分解由X-Pro、·D或·Q組成的肽鍵2，2，雙吡啶，1．1（）-菲咯啉菠蘿蛋白酶巰基蛋白酶無特異性α2巨球蛋白，TPCK，TLCK，烷化羧肽酶A鋅金屬蛋白酶帶有自由氨基酸的L—氨基酸羧基端；不能分解R、P或羥脯氨酸EDTA，EGTA羧肽酶B鋅金屬蛋白酶K，R羧基端EDTA，EGTA，堿性氨基酸羧肽酶Y絲氨酸羧肽酶氨基酸羧基端PMSF組織蛋白酶C琉基蛋白酶氨基端雙肽，可通過K，R或P氨基端作為...
TCA沉淀——過濾法1．為了檢測放射性標(biāo)記物結(jié)合蛋白質(zhì)的摻入量，每個(gè)樣本吸取一定量（通常為5／／1）加入盛有100t~lBSA溶液（1mg／m1）的1．5m1錐形管中。2．每管加入lmll0％冰冷的三氯醋酸，混勻。3．冰上孵育30min。4．將玻璃纖維濾紙置于一適當(dāng)?shù)倪^濾器上，用少量的10％三氯醋酸真空過濾，預(yù)先濕潤濾紙。5．滴加樣本于濾紙的中央，而末摻入標(biāo)記物則通過濾紙除去，被TCA沉淀的蛋白質(zhì)則吸附在濾紙上。6．再用少量的10％三氯醋酸（數(shù)毫升）洗滌2次。7．用少量的95...
疾病診斷、細(xì)菌鑒定，關(guān)鍵在鑒定毒素。從材料中如能迅速檢出毒素為，檢出速度快，治療預(yù)防能及時(shí)。從癥狀、流行病學(xué)懷疑肉毒癥后，應(yīng)先千方百計(jì)地在極短時(shí)期內(nèi)證明檢材中是否有肉毒梭菌毒素，搶時(shí)間救人。在設(shè)法證明毒素存在的同時(shí)，進(jìn)行細(xì)菌分離、鑒定及產(chǎn)毒能力測定。（1）檢驗(yàn)程序檢驗(yàn)菌株是否產(chǎn)生肉毒毒素，或污染食品中是否有產(chǎn)毒素的肉毒梭菌存可按圖進(jìn)行檢驗(yàn)。檢樣接種肝湯35℃培養(yǎng)3天檢樣接種TPCYT肉湯2℃培養(yǎng)5天↓↓取液體部分7000r/min離心30min↓取上清中過滅菌↓↓↓血清學(xué)試驗(yàn)...
本實(shí)驗(yàn)是以質(zhì)體pBluescriptIISK（-）為材?，以?同限制酶作用，經(jīng)電泳分離DNA片段后，比較各DNA片段的泳動?與分子?，藉此練習(xí)限制酶的使用、電泳分析及簡?DNA限制圖譜（restrictionmap）的建?。以DNA操作為主的各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)必須維持溶液與容器?受核酸分解酵素污染，因此請同學(xué)遵守以下原則并養(yǎng)成習(xí)慣：a.請隨時(shí)保持實(shí)驗(yàn)桌的清潔。b.微?移液器頭及微?離心管取出后?即將蓋子蓋上。c.請勿用手觸摸滅過菌的微?移液器頭、微?離心管及各種容器的內(nèi)部。d.溶液打開...
當(dāng)前位置：
