用于染色的培養(yǎng)細(xì)胞既可以是貼壁細(xì)胞,也可以是懸浮細(xì)胞。貼壁細(xì)胞通常使其生長(zhǎng)在合適的固相支持物上;懸浮細(xì)胞可以直接固定,也可以通過(guò)甩片或使用化學(xué)黏合劑黏附在固相支持物上。
(一)貼壁細(xì)胞
貼壁細(xì)胞的準(zhǔn)備比較簡(jiǎn)單,可以使其生長(zhǎng)于適當(dāng)?shù)妮d玻片、蓋玻片或塑料組織培養(yǎng)皿中。如果實(shí)驗(yàn)要求高分辨率或需拍照,細(xì)胞應(yīng)生長(zhǎng)于載玻片或蓋玻片上;如果實(shí)驗(yàn)的分辨率要求不高,或者是大量樣品的篩選,可使細(xì)胞生長(zhǎng)于塑料組織培養(yǎng)皿中。
將貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)在固相支持物上有其*的優(yōu)點(diǎn),操作步驟,如沖洗、固定、通透及染色均較簡(jiǎn)單易行,便于同時(shí)進(jìn)行大量不同種類(lèi)細(xì)胞、不同抗體及不同條件下的操作。
(二)懸浮細(xì)胞
懸浮細(xì)胞的制備可以采用多種不同的方法。如果是進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)部抗原的定位,一般可用甩片機(jī)將細(xì)胞甩在一張載玻片上,也可以先用帶電的交聯(lián)劑涂在蓋玻片上,然后再將細(xì)胞黏附于蓋玻片上。此后的操作步驟與貼壁細(xì)胞相同。
在某些情況下,細(xì)胞可在懸浮狀態(tài)下染色。這是因?yàn)樵谄浜蟮牟僮鞑襟E中,需要細(xì)胞在懸浮狀態(tài)下進(jìn)行,例如細(xì)胞分選。在懸浮狀態(tài)下處理細(xì)胞更加繁瑣,因?yàn)槊恳幌礈觳襟E均須離心、再懸浮細(xì)胞。