mirus Trans IT-VirusGEN® 轉(zhuǎn)染試劑

Trans IT-VirusGEN® 轉(zhuǎn)染試劑 旨在增強(qiáng)包裝和轉(zhuǎn)移質(zhì)粒向貼壁和懸浮 HEK 293 細(xì)胞類型的遞送，以增加重組腺相關(guān)病毒 (AAV) 和慢病毒的產(chǎn)量。

Trans IT-VirusGEN® 轉(zhuǎn)染試劑的主要優(yōu)點(diǎn) 包括：

• 性能 – 高效 DNA 遞送，用于生產(chǎn)高滴度病毒載體

• 可擴(kuò)展性 – 從 < 1 ml 到大規(guī)模培養(yǎng)的高效生產(chǎn)

• 靈活性 ——兼容不同的重組病毒和細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)

• 無動物源性 – 全合成轉(zhuǎn)染試劑配方

Trans IT-VirusGEN® 是學(xué)術(shù)研究和生物制藥發(fā)現(xiàn)的理想選擇。使用 VirusGEN® AAV 轉(zhuǎn)染試劑盒和 VirusGEN® LV 轉(zhuǎn)染試劑盒中包含的優(yōu)化增強(qiáng)劑可以進(jìn)一步提高滴度。

Trans IT-VirusGEN® 在懸浮和貼壁 AAV 細(xì)胞培養(yǎng)中優(yōu)于競爭對手試劑。 在 FreeStyle™ F17 培養(yǎng)基 (A) 中生長的懸浮 FreeStyle™ 293-F 細(xì)胞或貼壁 293T/17 細(xì)胞 (B) 用 pAAV-hrGFP、pAAV-RC 和 pAAV-Helper（比例為 1:1:1，1.5 µg）轉(zhuǎn)染/ml，Agilent Technologies），使用以下試劑：  Trans IT-VirusGEN®（2:1，體積：重量）、競爭產(chǎn)品 B4 (3:1)、競爭產(chǎn)品 B5 (3:3:1) 或 25 kDa PEI (4: 1、綜合科學(xué)）。使用收獲的病毒轉(zhuǎn)導(dǎo) HT1080 細(xì)胞，并在轉(zhuǎn)導(dǎo)后 48 小時使用番石榴 easyCyte™ 5HT 流式細(xì)胞儀測量 GFP 表達(dá)。功能效價是通過 GFP 陽性細(xì)胞少于 20% 的病毒稀釋液來測量的。誤差線代表一式三份孔的標(biāo)準(zhǔn)偏差。

Trans IT-VirusGEN® 在懸浮和貼壁慢病毒細(xì)胞培養(yǎng)中優(yōu)于競爭對手試劑。 在 FreeStyle™ F17 培養(yǎng)基 (A) 中生長的懸浮 FreeStyle™ 293-F 細(xì)胞或貼壁 293T/17 細(xì)胞 (B) 用 pLKO.1-puro-CMV-TurboGFP™ 轉(zhuǎn)移載體和由 MISSION® 提供支持的慢病毒包裝混合物轉(zhuǎn)染（ 1:1 比例，1 µg/ml），使用以下試劑：  Trans IT-VirusGEN®（3:1，體積：重量）、競爭產(chǎn)品 B4（2:1 (A) 或 3:1 (B)）、競爭產(chǎn)品 B5 （2:2:1 (A) 或 3:3:1 (B)）或 25 kDa PEI（4:1，Polysciences）。收獲上清液，過濾（0.45 µm），并使用 293T/17 細(xì)胞進(jìn)行滴定。慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)在 8 µg/ml Transduce存在下進(jìn)行 轉(zhuǎn)導(dǎo)后 72 小時使用番石榴 easyCyte™ 5HT 流式細(xì)胞儀測量 IT™ 和 GFP 表達(dá)。功能效價是通過 GFP 陽性細(xì)胞少于 20% 的病毒稀釋液來測量的。誤差線代表一式三份孔的標(biāo)準(zhǔn)偏差。

Trans IT-VirusGEN® 實現(xiàn)廣泛的可擴(kuò)展性 (AAV)。 使用 pAAV-hrGFP、pAAV-RC 和 pAAV-Helper（比例為 1:1:1，總計 1.5）轉(zhuǎn)染在 FreeStyle™ F17 培養(yǎng)基 (A) 中生長的懸浮 FreeStyle™ 293-F 細(xì)胞或貼壁 293T/17 細(xì)胞 (B) µg/ml，Agilent Technologies），使用 Trans IT-VirusGEN® 轉(zhuǎn)染試劑（試劑與 DNA 比例為 2:1（體積：重量），Mirus）在一定體積的培養(yǎng)皿中。收獲的病毒用于轉(zhuǎn)導(dǎo) HT1080 細(xì)胞，并在轉(zhuǎn)導(dǎo)后 48 小時通過流式細(xì)胞術(shù)測量 GFP 表達(dá)。功能效價是通過 GFP 陽性細(xì)胞少于 20% 的病毒稀釋液來測量的。誤差線代表一式三份的孔、燒瓶或培養(yǎng)皿的標(biāo)準(zhǔn)偏差。

與 PEI 相比， Trans IT-VirusGEN®具有更高的慢病毒生成轉(zhuǎn)染效率 。 使用Trans IT-VirusGEN® 轉(zhuǎn)染試劑（試劑與 DNA 比例為 3:1；體積：重量），用慢病毒包裝質(zhì)粒和 (a) 對照 RFP 轉(zhuǎn)移質(zhì)?；?(b) 靶向 SPdCas9-RFP 轉(zhuǎn)移質(zhì)粒轉(zhuǎn)染 HEK293T/  17 細(xì)胞) 或 25 kDa 線性 PEI（試劑與 DNA 比例為 3:1；重量：重量）。轉(zhuǎn)染后 17-22 小時拍攝明場和 RFP 圖像。

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